Общие принципы и методы генетической инженерии

Строение и свойства молекулы ДНК

Ферменты генетической инженерии

Рестриктазы

ДНК-лигаза

ДНК-полимераза I Е. coli

Обратная транскриптаза

Нуклеаза Ва131

Концевая дезоксинуклеотидил-транофсраза

Поли(А)-полимераза Е. coli

Методы конструирования гибридных молекул ДНК in vitro

Коннекторный метод

Рестриктазно-лигазный метод

Векторные молекулы ДНК

Введение молекул ДНК в клетки

Методы отбора гибридных клонов

Фенотипическая селекция

Гибридизация нуклеиновых кислот in situ

Функциональная комплементация

Радиоиммуноанализ белков in situ

Расшифровка нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК

«Плюс-минус»-метод

Метод Сэнгера

Метод Максама-Гилберта

Автоматическое секвенирование ДНК

Базы данных нуклеотидных и аминокислотных последовательностей

Геномные проекты

Амплификация последовательностей ДНК in vitro

Полимеразная цепная реакция

Примеры использования ПЦР

Блоттинг по Саузерну

Иммуноблоттинг

Разделение электрофорезом гигантских молекул ДНК

Методы химико-ферментативного синтеза двухцепочечньвсфрагментов ДНК

Метод Кораны

Конструирование ДНК-дуплексов из частично комплементарных полинуклеотидов

Конструирование искусственных генов из сверхдлинных полинуклеотидов

Использование для синтеза генов полимеразной цепной реакции

Векторная система грамотрицательной бактерии Escherichia coli

Введение плазмидных и фаговых молекул ДНК в клетки Е. coli

Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий

Сферопласты

«Кальциевые» компетентные клетки

Электропорация

Упаковка ДНК фага лямбда в капсиды in vitro

Молекулярные векторы Е. coli

Клонирующие плазмидные векторы

Молекулярные векторы на основе ДНК фага лямбда

Космиды

Искусственные бактериальные хромосомы

Фазмиды

Клонирующие векторы на основе нитевидных фагов

Фагмиды

Векторные плазмиды, обеспечивающие прямой отбор гибридных ДНК

Векторы, обеспечивающие экспрессию чужеродных генов в клетках Е. coli

Векторы Е. coli, детерминирующие секрецию чужеродных белков

Достижение повышенной продукции белков, кодируемых генами, клонированными в клетках Escherichia coli

Эффект дозы гена при молекулярном клонировании

Влияние эффективности транскрипции клонированных генов на уровень их экспрессии

Повышение эффективности трансляции матричных РНК

Стабилизация чужеродных мРНК и белков в клетках Е. coli

Экспрессии клонированных эукариотических генов в клетках Escherichia coli

Сравнительный анализ организации и реализации генетической информации у прокариот и эукариот

Экспрессия хромосомных эукариотических генов в клетках Е. coli

Клонирование ДНК-копий эукариотических матричных РНК и их экспрессия в клетках Е. coli

Экспрессия в Е. coli химико-ферментативно синтезированных ген-эквивалентов эукариотических полипептидов

Конструирование штаммов — продуцентов первичных метаболитов на основе Escherichia coli

Направленный мутагенез молекул ДНК in vitro

Генно-инженерные делеции и вставки последовательностей ДНК

Статистический мутагенез гибридных ДНК

Сегмент-направленный мутагенез in vitro

Олигонуклеотид-направленный мутагенез in vitro

Белкован инженерии

Получение новых форм белков олигонуклеотид-направленным мутагенезом

Изучение доменной структуры белков

Создание белков с гибридными свойствами

Иммунотоксины

Фаговый дисплей

Принцип метода

Дептидные фаговые библиотеки

Фаговый дисплей белков

Направленная эволюция белков

Фаговый дисплей антител

Стабильность гибридных молекул ДНК в клетках Escherichia coli

Векторные системы грамотрицательиых бактерий, ие относящихся к роду Escherichia

Плазмиды широкого круга хозяев

Молекулярные векторы на основе плазмид группы несовместимости IncQ

Молекулярные векторы на основе плазмид группы несовместимости IncP

Использование векторов широкого круга хозяев для молекулярно-генетических исследований грамотрицательных бактерий

Бифункциональные (челночные) векторные плазмиды

Генно-инженерная система грамположительных бактерий рода Bacillus

Введение молекул ДНК в клетки Bacillus

Строение клеточной стенки грамположительных бактерий

Трансформация компетентных клеток

Универсальные методы введения плазмид

Трансфекция

Молекулярные векторы Bacillus

Клонирующие векторы на основе плазмид стафилококков и стрептококков

Векторы на основе плазмид Bacillus

Векторные плазмиды, реплицирующиеся в В. subtilis ив? coli

Векторная система секреции чужеродных белков из клеток Bacillus

Плазмидные интегративные векторы

Фаговые векторы

Экспрессия чужеродных генов в клетках Bacillus

Особенности строения и экспрессии генов грамположительных бактерий

Оптимизация экспрессии клонированных генов

Стабильность плазмид в клетках В. subtilis

Генно-инженерные системы грамположительных бактерий, не относящихся к роду Bacillus

Бактерии рода Streptococcus

Бактерии рода Streptomyces

Коринеформные бактерии

Некоторые проблемы, возникающие при синтезе в бактериях эукариотических белков

Генно-инженериая система дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Генетическая организация дрожжей-сахаромицетов

Плазмиды 5. cerevisiae

Плазмидная трансформация клеток дрожжей

Молекулярные векторы 5. cerevisiae

Векторы интеграции

Клонирующие векторы

Стабильные молекулярные векторы

Линейные молекулярные векторы

Клонирование генов в клетках S. cerevisiae

Экспрессирующие векторные системы 5. cerevisiae

Секреция чужеродных белков из клеток 5. cerevisiae

Продукция чужеродных белков в S. cetevisiae

Двухгибридная система дрожжей для идентификации белок-белковых взаимодействий

Генетическая инженерия культивируемых клеток млекопитающих

Введение молекул ДНК в клетки млекопитающих

Введение вирусных ДНК

Введение плазмид и фрагментов ДНК

Стабильность гибридных молекул ДНК в культивируемых клетках млекопитающих

Генетическая трансформация клеток млекопитающих

Генетическая трансформация мутантних линий

Котрансформация

Доминантные амплифицируемые маркеры генетической трансформации

Эписомные векторы генетической трансформации

Регулируемая экспрессия целевых генов

Векторные системы на основе вирусов животных

Вирус SV40 как молекулярный вектор

Структурно-функциональная организация генома SV40

Литические векторы на основе ДНК вируса SV40

Нелитические эписомные векторы на основе генетических элементов SV40

Трансформирующие векторы на основе SV40

Особенности экспрессии клонированных последовательностей в составе генома SV40

Молекулярные векторы на основе генома вируса папилломы быка

Аденовирусы в качестве молекулярных векторов

Молекулярно-генетическая организация Ad2 и Ad5 человека

Конструирование гибридных аденовирусов

Рекомбинантные аденовирусные вакцины

Генная терапия

Молекулярные векторы на основе вирусов семейства Herpesviridae

Конструирование in vivo гибридных вирусов простого герпеса

Разработка живых вакцин на основе герпесвирусов животных

HSV-ампликоны

Плазмидные векторы на основе элементов генома вируса Эпштейна-Барр

Экспрессирующие векторы на основе поксвирусов

14.5.1. Структура вириона и генома ортопоксвирусов

14.5.2. Конструирование гибридных вирусов осповакцины

14.5.3. Использование гибридных поксвирусов для вакцинации домашних и диких животных

14.6. Трансдукция генов с помощью ретровирусов

Молекулярно-генетическая организация ретровирусов

Ретровирусные молекулярные векторы

Генетическая нестабильность гибридных ретровирусов

Ретровирусы в качестве инструмента генной терапии

Вирусы насекомых как векторы высокоэффективной экспрессии чужеродных генов

Молекулярно-генетическая организация бакуловирусов

Клонирование и экспрессия чужеродных генов в составе генома бакуловирусов

Упрощенная система создания гибридных бакуловирусов Bac-to-Bac

Векторная система иа основе транспозонов эукариот

Противовирусные вакцины

Цельновирионные вакцины

Вакцины на основе вирусных антигенов

Генно-инженерные поливалентные живые вакцины

ДНК-вакцины

Вакцины против вируса иммунодефицита человека

Пандемия СПИДа

Тестирование HIV-инфекции

Стадии развития HIV-инфекции

Варианты вакцин против вируса иммунодефицита человека

Трансгенные животные

Получение трансгенных животных

Клетки тератокарциномы мыши

Микроинъекция ооцитов

Эмбриональные стволовые клетки

Ретровирусы

Экспрессия генов в трансгенных мышах

Трансгенные животные в фундаментальных исследованиях

Нокаутные мыши

Регулируемое включение-выключение генов in vivo

Биотехнологическое применение трансгенных животных

Трансгенные растения

Перенос генов в растения из бактерий рода Agrobacterium

Использование плазмид Ті A. tumefaciens для создания трансгенных растений

Получение трансгенных растений с помощью бинарной векторной системы A. tumefaciens

Экспрессия и наследование чужеродных генов, введенных в растения в составе Т-ДНК

Прямой метод введения трансгена в растения

Синтез в растениях чужеродных белков медицинского назначения

Терапевтические и диагностические антитела

Съедобные вакцины

Перенос генов в растения с помощью вирусов

Трансгенная система хлоропластов

Белковый сплайсинг в трансгенных растениях

Удаление маркерных генов из трансгенных растений

Трансгенные растения с новыми биотехнологическими свойствами

Трансгенные растения в сельском хозяйстве